Come si ottiene il DNA ricombinante?

Come si ottiene il DNA ricombinante?

Con il termine di DNA ricombinante si intende una sequenza di DNA ottenuta artificialmente dalla combinazione di materiale genetico di origini differenti, come può avvenire per un plasmide contenente un gene d'interesse.

Che cosa significa DNA ricombinante?

Porzione di genoma prelevato da un organismo e trasferito in altri microrganismi così da essere espresso in condizioni controllate ottendo in questo modo le proteine codificate da questa regione di DNA.

Cosa sono i batteri ricombinanti?

In pratica isolare dei geni che ci interessano all'interno di un genoma (gene di interesse o esogeno), trasferirlo tramite un vettore di espressione in cellule o microrganismi diversi, farlo incorporare nel genoma della cellula ospite e clonarlo cioè amplificarlo in vivo.

Come vengono selezionati i cloni ricombinanti?

inizialmente si effettuato il taglio del plasmide con l'enzima di restrizione. lo stesso enzima di restrizione taglia anche il DNA da clonare. viene effettuato il mescolamento dei frammenti di DNA tagliati con il vettore plasmidico tagliato. la DNA ligasi salda i frammenti di DNA con il vettore plasmidico.

Cosa sono gli enzimi di restrizione ea cosa servono?

In sostanza gli enzimi di restrizione, che si trovano in molti procarioti dove hanno il ruolo di spezzare molecole di DNA estraneo, sono delle endonucleasi che catalizzano la scissione di entrambi i filamenti di DNA in corrispondenza di una specifica sequenza nucleotidica.

Come si inserisce un gene in un vettore?

Per inserire le molecole selezionate di cDNA si utilizzano i vettori plasmidici. Per inserire nel vettore la sequenza scelta è necessario tagliare una sequenza di DNA plasmidico e sostituirla con quella selezionata.

Come si prepara un plasmide?

inizialmente si effettuato il taglio del plasmide con l'enzima di restrizione. lo stesso enzima di restrizione taglia anche il DNA da clonare. viene effettuato il mescolamento dei frammenti di DNA tagliati con il vettore plasmidico tagliato. la DNA ligasi salda i frammenti di DNA con il vettore plasmidico.